1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。

2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中，生长24小时后，单层细胞融合度应达到70-80%。

3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕，划痕横穿过孔，枪头尽量与板孔的底部垂直，不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。

4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕，每孔划痕成十字交叉型。

5.划痕后，用培养基轻轻的清洗板孔2次，以去除脱落细胞。

6.每孔添加新鲜培养基。

7.（培养基中含有某些成分，如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质）

8.细胞生长48小时（或根据时间需要）。

9. 1xPBS清洗细胞两次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。

10. 1%的结晶紫（2%乙醇溶解）染色30分钟。