实验方法

酪蛋白的制备实验

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来源：生物化学与分子生物学实验指导，邵雪玲 等，武汉大学出版社，2003

等电点沉淀法

实验原理

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。

实验材料

牛乳

试剂/试剂盒

乙醇 无水乙醚 醋酸 醋酸钠 乙醇 乙醚

仪器/耗材

离心机 抽滤装置 精密pH 试纸或酸度计 电炉 烧杯 温度计

实验步骤

1. 将100 ml牛乳放到500 ml烧杯中，加热到40 ℃，在搅拌下慢慢地加入预热到40 ℃、pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液100  ml。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬乳液冷却至室温，离心(3000 r/min)10 min，弃去上清液，或4层纱布过滤，得酪蛋白粗制品。
 
2. 用少量水洗沉淀3次，离心(3000 r/min)10 min，弃去上清液。
 
3. 在沉淀中加入30 ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬乳液转移至布氏漏斗中抽滤，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次，最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
 
4. 取出沉淀，摊开在表面皿上去除乙醚，干燥后得酪蛋白纯品。称重量，计算百分含量。

其他

1 . 为什么酪蛋白可在等电点pH 下沉淀下来?

2 . 为什么可以用有机溶剂洗涤蛋白质沉淀?

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