实验方法

血清总胆固醇的测定实验

难度系数: 3.0

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(来源:生物化学与分子生物学实验指导,邵雪玲等,武汉大学出版社,2003)

无水乙醇提取法

实验原理

用无水乙醇提取血清中的胆固醇,同时沉淀蛋白质,向提取液中加入硫磷铁显色剂,胆固醇与浓硫酸及三价铁作用,生成稳定的紫红色化合物。与同样处理的标准样进行比色,求得其含量。

实验材料

胆固醇

实验步骤

溶液配制:

1. 胆固醇标准贮存液(1 ml中含1.0 mg):精确称取干燥重结晶胆固醇100  ml,溶于无水乙醇内(因不易溶解,可稍加温助溶),然后移入100 mg容量瓶中,加无水乙醇至刻度,贮于棕色瓶中,密塞瓶口置4  ℃冰箱中。配应用液时,应将其预先恢复至室温。
 
2. 胆固醇标准应用液(1 ml中含0.04 mg):取上述贮存液4  ml 于100 ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至100 ml刻度,贮存于棕色瓶中,放冰箱保存,使用时应先恢复至室温。
 
3. 铁贮存液:称取六水三氯化铁2.5 g,溶于87%磷酸内,并磷酸加至100 ml,贮存于棕色瓶中,此液在室温中可长期保存。
 
4. 显色剂:取铁贮存液8 ml,加浓硫酸至100 ml,此液在室温可保存6~8周。

操作步骤:

1. 取小试管1支,准确吸取0.1 ml 血清于管底,加入无水乙醇4.9 ml,混匀,静置10 min,以2000 r/min 离心10 min。吸取上清液置另一洁净的小试管中备用。
 
2. 另取3支大试管标明“测定”、“标准”和“空白”并按下表配制。


立即振荡15~20 次,置室温下冷却10 min,以空白管调零点,用550 nm 波长进行比色,测定各管光密度。

3. 计算

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