划痕法
实验原理
实验材料
实验步骤
所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)
二.流程:
1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。
下面是照片,细胞NIH3T3
0h
注意事项
1.划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。
2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。