淋巴细胞增殖功能的测定实验
实验原理
实验材料
实验步骤
2. 加入96 孔培养板中,1~2x105 细胞/100 ul/孔,每组设3孔。加入最适剂量PHA,100 ul/孔,同时设不加PHA阴性对照。如观察细胞因子(如IL-2)或其它刺激物(PMA)对增殖功能的调节作用,则根据加入因子的浓度而确定加入量,一般每孔最终体积为200 ul,37 ℃、5 % CO2孵育,66 h
3. 每孔加入0.5~1 uci 3H-TdR(50ul),继续培养6~12 h
4. 用DYQ-Ⅱ型多头细胞收集仪收集样品于"9999"型玻璃纤维滤纸上
5. 烤干后β液闪仪计数
6. 计算
(1)增殖水平直接用CPM值表示。
(2)也可用刺激指数(SI)表示
PHA(或实验组)cpm-机器本底
SI=───────────────
阴性对照组cpm-机器本底
注意事项
2. PHA、ConA、PWM、LPS等在正式实验前均需摸索最适剂量或亚适剂量。厂家和批号不同丝裂原作用常有很大差别,如Wellcome公司PHA终浓度最适剂量为1~3 ug/ml,而广州医工所PHA约为20~100 ug/ml。
3. 根据实验需要,对不同种(人、小鼠、大鼠、兔、狗等)不同来源淋巴细胞(胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃腺、外周血等)均应进行最适细胞浓度、圈养时间和刺激物浓度的摸索。