将5 ％SRBC0.4 ml注射于小鼠腹腔，4 天后拉脱颈椎处死，取出脾脏放在已加入6 ml Hank's液的平皿中。在100 目不锈钢网上研磨，过滤混匀，从中吸取1 ml加入试管中，加满Hank's液混匀，离心1000 rpm，10 分钟。将沉淀的脾细胞恢复1 ml容积，即为约1x10⁷ /ml浓度的细胞悬液。
 

2.  制作小室
 

取无脂载玻片（75 mmx25 mm）, 平置桌面上。用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条，然后再覆盖上同样的载玻片，即形成两个小室。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边（无需浸入过深，以能封闭小室边缘为准）。
 

3.  小室灌注细胞悬液
 

取 1x10⁷ /ml脾细胞悬液100 ul

10 ％SRBC 200 ul

新配补体 200 ul

Hank's液 1 ml

2.  小室边缘需用石蜡封严。

3.  37℃孵箱孵育时，必须放平，不可倾斜。
 

4.  观察结果时，应注意辨别空斑与气泡的区别，避免将气泡误认为溶血空斑。

观察小室内的透明空斑，一个空斑即代表一个空斑形成细胞（PFC），即B细胞。